实验参数
默认标准曲线为 OD = 0.90336 × 浓度 + 0.1902。浓度单位按 ug/ul 处理。
BCA稀释倍数
10.00
体系总体积 / 蛋白原液体积
总蛋白需求
100.00 ug
单次上样 × WB次数
最终体系体积
50.00 ul
总蛋白 / 终浓度
Loading buffer
10.00 ul
最终体系 / X
每次上样体积
10.00 ul
单次上样蛋白 / 终浓度
建议终浓度
等待OD
按最低样本留5%余量
| 蛋白编号 | 样品 OD | 真实浓度 ug/ul |
蛋白原液 ul |
Loading buffer ul |
RIPA ul |
可设终浓度上限 ug/ul |
状态 | 操作 |
|---|
计算方法
本工具默认按照“先测浓度,再统一总蛋白量和终浓度”的方法配样,适合 WB 上样前快速归一化。
浓度换算
真实浓度 = ((OD - b) / m) × (BCA体系总体积 / BCA中蛋白原液体积)
归一化体积
总蛋白 = 单次上样蛋白 × WB次数
最终体系 = 总蛋白 / 设定终浓度
蛋白原液 = 总蛋白 / 真实浓度
Loading buffer = 最终体系 / Loading buffer倍数
RIPA = 最终体系 - 蛋白原液 - Loading buffer
策略与提醒
更稳妥的归一化策略
不要固定套用 2 ug/ul。先看所有样本的最低真实浓度,再用“最低样本 × (1 - 1/Loading X)”估算全组可行终浓度上限;实际设定建议再留 5% 到 10% RIPA 余量。若 RIPA 为负,优先降低终浓度、减少总上样蛋白或提高 Loading buffer 倍数。