实验参数
最低浓度对齐法：以未排除样品中的最低浓度为基准，其他样品加 RIPA 对齐后再加入 Loading buffer。
使用参数
点击“保存到浏览器”后，在同一浏览器、同一页面来源再次打开且未清除站点数据或本地存储时，会自动沿用保存的实验参数；点击“保存参数 TXT”后，可在后续使用时通过“上传参数”恢复之前的标曲等设置。两种方式均仅保存实验参数，不包含样品表和计算结果。默认使用新赛美 BCA 试剂盒标曲。
未读取浏览器参数
BCA稀释倍数
10.00
体系总体积 / 蛋白原液体积
最低浓度样本
等待OD
仅从未排除样品中选取
最低原液浓度
等待 OD
以该浓度作为统一基准
对齐后终浓度
等待 OD
最低原液浓度 × (X - 1) / X
样品状态
0 / 0
纳入 / 排除
| 蛋白编号 | 样品 OD | 吸取上清体积 μL |
真实浓度 μg/μL |
Loading buffer μL |
RIPA μL |
稀释后终浓度 μg/μL |
状态 | 操作 |
|---|
使用方法、计算原理与反馈入口 说明
使用说明
- 首先在【实验参数】部分设置标准曲线、BCA 孔内样本总体积、BCA 中蛋白原液体积与 Loading buffer 倍数；系统会根据两项 BCA 体积自动计算检测稀释倍数。
- 之后在【样品表】部分填写蛋白编号、样本 OD 与吸取上清体积。编号可自定义为 NC1、WT1 等；在编号列按 Enter 时，末尾数字会在下一行自动加 1（如 NC2 → NC3），留空则从 1 开始。OD 与上清体积列按 Enter 也会跳到下一行，新行默认沿用上一样本的上清体积。批量录入时可点击“从 Excel 导入”，按照弹出的使用图示在 Excel 中选中数据并复制，再粘贴到左侧三列表格并按需修改，随后点击“自动识别”；若选择“不再提示”，之后仍可在导入窗口点击“查看复制示意”。若识别不出，请在右侧手动选择样本名、OD 和体积所在列后导入。Windows、Linux 与 macOS 的常见换行格式均可直接粘贴。系统会从未排除且 OD、上清体积均有效的样本中选取最低真实浓度作为基准，为其余纳入样本计算需补加的 RIPA 体积，并为所有有效样本计算 Loading buffer 体积。组织样本可重复进行多次 BCA 检测并多次调整浓度，以提高准确度。
- 如果某一个或某几个样本浓度特别低，为防止其影响其他高浓度样本，可将其设置为排除样本。排除后，该样本不参与最低浓度基准，只会直接加入 Loading buffer，并计算加入 Loading buffer 后的终浓度；后续 WB 上样可根据状态提示提高上样量。
- 默认 BCA 曲线来自新赛美（NCM）WB6501 BCA 蛋白定量试剂盒，采用 BSA 浓度梯度法，在 37℃ 孵育 30 min、每个标准点设置 3 个复孔的检测条件下获得。如需自行设置曲线，可选择“自定义标曲”并填写斜率、截距，然后点击“保存参数 TXT”和“保存到浏览器”。“保存到浏览器”可在下次打开时沿用上一次参数；若清除该网站的浏览器站点数据或本地存储，保存内容会丢失。建议同时保存 TXT，参数丢失后可点击“上传参数”恢复。两种方式均仅保存实验参数，不包含样品表和计算结果。
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计算方法
系统以未排除且输入有效样品中的最低真实浓度作为统一基准，为其余纳入样品计算 RIPA，并为所有有效样品计算 Loading buffer。
浓度换算
真实浓度 = ((OD - b) / m) × (BCA体系总体积 / BCA中蛋白原液体积)
最低浓度对齐法
最低浓度 = 所有未排除且有效样品真实浓度中的最小值
预混总体积 = 吸取上清体积 × 当前样品浓度 / 最低浓度
RIPA = 预混总体积 - 吸取上清体积
Loading buffer = 预混总体积 / (Loading buffer倍数 - 1)
稀释后终浓度 = 最低浓度 × (Loading buffer倍数 - 1) / Loading buffer倍数
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